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核酸质控作为分子生物学最基础的实验之一,核酸定量的准确与否直接决定着下游实验的结果。目前市面上在用的核酸定量方法主要是紫外光吸收法和Qubit荧光染料法。
紫外光吸收法利用分光光度计测定260nm处的吸光度,对DNA和RNA进行定量。与此同时,还能通过计算OD260/OD280估计核酸的纯度,但检测数值极易受到其他污染物(如游离核苷酸、盐和有机化合物)的影响。
Qubit荧光染料法利用荧光染料特异地与双链DNA、单链DNA、RNA或蛋白质相结合,并在特定波长光源的激发下,发出荧光,并不受样本中可能存在的其他杂质分子影响,荧光强度与样品中的靶分子浓度相对应。
表1.核酸定量主流方法比较
紫外吸收法与qubit荧光法定量各有优势,互相配合。针对常规核酸样本初步定量浓度纯度和是否存在污染物等信息可选择吸光度法定量,Qubit定量更适合低浓度的珍贵样品或需要精确定量的下游实验,如二代测序、荧光定量PCR等。
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