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MicroRNAs(miRNAs)是一种大小约21-23个碱基的单链小分子RNA,是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成。miRNA主要与靶基因mRNA3‘端非编码区域特异性结合,调控转录后靶基因mRNA的翻译过程,从而阻断mRNA翻译和促进mRNA降解导致蛋白质表达降低。miRNA的作用涉及个体发育、组织分化、细胞增殖和细胞凋亡等多种心血管疾病的发生发展。
图.miRNA体内合成示意
miRNA研究的关键是如何准确且特异性地检测分析miRNA。目前检测分析miRNA的方法中最为常用的是荧光定量PCR。但是miRNA本身相对较小,传统的RNA提取、反转录和定量方法难以高效的保证miRNA的检测,选对适配的方法此时则显得尤为重要。
传统的有机提取通常提取的是较大分子量的RNA,例如mRNA和核糖体RNA,但对于miRNA的提取效果则不太理想,可能是由于小分子量的miRNA不易被醇类沉淀。针对这个问题,翌圣匠心研发了专门针对miRNA提取的产品-MolPure® Cell/Tissue miRNA Kit 细胞/组织miRNA提取试剂盒。
产品推荐
19331ES-MolPure® Cell/Tissue miRNA Kit 细胞/组织miRNA提取试剂盒
采用MolPure® RNA Column M1和microRNA Column M1以及新型的溶液体系,适用于从多种新鲜或冻存的动物组织或培养细胞中快速提取各种小RNA。试剂盒内的MolPure® RNA Column M1可选择性吸附核酸,不吸附蛋白质、多糖和其它非核酸类物质;microRNA Column M1则能从总RNA中有效富集到15-30 nt左右的小RNA(包括siRNA和miRNA)。
产品性能
快速,简捷,可在30分钟内完成miRNA提取
不用乙醇沉淀,减少小分子RNA丢失
成熟的miRNA的长度只有20nt左右,通常正向引物就会覆盖其全长甚至会有多余部分,反向引物就无处安置了。目前市面上解决方案就是在反转录时设法增加反转录产物长度。常见的方法有加尾法和茎环法。
加尾法利用PolyA 聚合酶为成熟的miRNA加上Poly(A)尾,以带有通用序列的Oligo-dT作为反转录引物,合成加长的miRNA对应cDNA第一链。茎环法以折叠为茎环结构的通用序列作为引物合成加长的miRNA对应cDNA第一链,后续扩增过程中,茎环结构在适宜的温度下会被打开,和相关扩增引物结合。
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